鼠肝
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| 鼠肝 Shǔ Gān |
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|---|---|
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| 別名 | |
| 功效作用 | 化瘀；解毒療傷。主肌膚破損；聤耳流膿 |
| 英文名 | Mouse liver |
| 始載于 | 《本草經(jīng)集注》 |
| 毒性 | |
| 歸經(jīng) | 肺經(jīng)、肝經(jīng) |
| 藥性 | 平 |
| 藥味 | 甘、苦 |
藥用
(《本草經(jīng)集注》)
【來源】為鼠科動物褐家鼠、黑家鼠等的肝。
【功用主治】
①《本草經(jīng)集注》：“治產(chǎn)難?！?/p>
②《綱目》：“治箭鏃不出，搗涂之?！薄 ?/p>
相關(guān)研究示例
目的： 觀測中藥肝復(fù)健沖劑對二乙基亞硝胺（DEN）誘導(dǎo)大鼠肝纖維化形成的影響.
方法： 建立DEN誘導(dǎo)大鼠肝硬化模型，同時給予肝復(fù)健沖劑進行干預(yù)，應(yīng)用天狼紅苦味酸特染法、免疫組化染色法及計算機圖像分析技術(shù)檢測中藥對DEN致大鼠肝纖維化過程膠原沉淀及肝細胞增殖特性的影響.
1材料和方法
1.1材料SD雄性大鼠，體質(zhì)量150~180 g，由第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供. 二乙基亞硝胺(DEN)購自Sigma公司. 天狼紅（解放軍第475醫(yī)院贈送）. PCNA檢測試劑盒購自DAKO公司. 中藥飼料：肝復(fù)健沖劑按30.4 g？kg-1均勻混合于基礎(chǔ)飼料中壓制而成（第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供）.
1.2方法
1.2.1模型建立大鼠適應(yīng)環(huán)境3 d隨機分為模型組（Model）及中藥組(Ganfujian，GFJ)，每組各30只，分別以0.1 g.L-1 DEN自由飲水，同時分別給予基礎(chǔ)飼料或含中藥的飼料喂養(yǎng). 16 wk時停用DEN飲水及中藥飼料. 考慮到造模過程大鼠有一定死亡率，分別于建模開始后每4 wk兩組各處死5只大鼠，剩余大鼠留繼續(xù)觀察. 取肝組織固定于100 g.L-1甲醛溶液，石蠟包埋，切片厚4 μm. 常規(guī)HE染色、切片膠原特殊染色及免疫組化染色.
1.2.2切片膠原染色按天狼紅飽和苦味酸法［4］. 普通石蠟切片，厚4 μm；常規(guī)脫蠟至水，0.1 mol？L-1天狼紅飽和苦味酸，避光室溫孵育20 min；不洗，950 mL？L-1乙醇脫水，二甲苯透明，封片.
1.2.3PCNA免疫組織化學(xué)染色取材肝組織固定于100 mL？L-1緩沖甲醛溶液24 h，常規(guī)石蠟包埋，切4 μm厚切片，二甲苯、梯度乙醇脫蠟至水；染色方法為免疫ABC法. 以0.1 mol？L-1 PBS 取代一抗作陰性對照，以正常大鼠肝組織作正常對照.
1.2.4染色結(jié)果判定及計算機圖像分析肝臟背景為淡黃色，膠原陽性著色呈紅色， 采用HPIAS1000高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)，隨機選擇5個匯管區(qū)進行染色膠原的定量分析(面積占視野面積)，取其均值. PCNA陽性著色為覆蓋胞核的棕黃色顆粒. 用網(wǎng)格（10×10）測試法計數(shù)陽性肝細胞. 切片各選擇10個按同一方向移行、不重疊的高倍鏡視野（×40），記數(shù)陽性及陰性細胞數(shù)（100個細胞）.
統(tǒng)計學(xué)處理：采用SPSS統(tǒng)計分析軟件對所獲得的數(shù)據(jù)進行組間秩和檢驗.
2結(jié)果
2.1大鼠肝纖維化過程組織形態(tài)學(xué)變化模型組大鼠使用DEN 4~8 wk時肝表面由平滑逐漸變?yōu)榇植?，可見小顆粒，呈局灶性. 光鏡下肝細胞腫脹，空泡變性，局灶性壞死，伴炎細胞浸潤，并逐漸出現(xiàn)纖維組織增生. 12 wk時40%大鼠已出現(xiàn)明顯肝硬化，肝表面更加粗糙，肝臟增大、腫脹，色暗或淡. 16 wk時大鼠均有肝硬化表現(xiàn)，結(jié)節(jié)增多變大，肝臟縮小，組織學(xué)有大量形態(tài)不一，大小排列不齊的假小葉形成. 部分大鼠肝臟已出現(xiàn)早期癌結(jié)節(jié)，鏡下可見少量癌細胞增生. 中藥組大鼠各時期肝臟損害均較單純誘導(dǎo)組輕，12 wk無肝硬化大鼠，16 wk 50%大鼠出現(xiàn)肝硬化，但未發(fā)現(xiàn)癌變.
2.2大鼠肝纖維化過程肝內(nèi)膠原沉積變化模型組大鼠4 wk肝內(nèi)即出現(xiàn)少量紅色膠原陽性染色，多集中于匯管區(qū). 隨著肝內(nèi)病變加重，假小葉的形成，肝臟沉積的膠原逐漸增多， 16 wk病變以結(jié)節(jié)性肝硬化為主，切片膠原沉積量亦達到頂峰. 中藥組大鼠肝內(nèi)病變較模型組明顯減輕，肝硬化發(fā)生晚，肝內(nèi)膠原沉積量少，在4 wk及12 wk兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<；0.05， Tab 1).
2.3大鼠肝纖維化過程肝細胞陽性表達PCNA情況在模型初期即可見少量肝細胞PCNA陽性著色，隨著模型進展，大鼠肝臟PCNA陽性表達的肝細胞數(shù)目逐漸增加，并在12～16 wk呈明顯攀升趨勢. 中藥組大鼠PCNA陽性的肝細胞數(shù)在各期均低于模型組，其中12～16 wk差異顯著(P<；0.05， Tab 2).
3討論
肝纖維化是許多慢性肝病重要的中間環(huán)節(jié)，是由于肝內(nèi)纖維生成與降解失衡，致使過多的膠原在肝內(nèi)沉積，常伴于炎癥并可發(fā)展為肝硬化. 肝纖維化形成作為肝硬化發(fā)展過程中的一個重要現(xiàn)象，與肝硬變的發(fā)展是平行的［5］，因此肝纖維化程度的精確了解是慢性肝病研究不可少的. 然而常用的血清學(xué)指標(biāo)和組織學(xué)纖維化分級標(biāo)準(zhǔn)卻難以直接、準(zhǔn)確反映肝臟內(nèi)膠原沉積變化. 本文采用切片膠原圖像定量處理方法具有準(zhǔn)確、客觀、數(shù)據(jù)可信度高等特點，能精確反映肝內(nèi)膠原沉積（主要為I， III型膠原）變化［4］. 本實驗中應(yīng)用該法檢測DEN誘導(dǎo)大鼠肝纖維化過程中肝內(nèi)膠原沉積的變化，結(jié)果顯示隨著肝細胞變性、炎癥高峰到橋接性壞死、肝硬化形成，肝臟形態(tài)學(xué)改變與膠原沉積呈同步變化.
細胞的異常增殖是癌變發(fā)生的主要特征. PCNA是一種從細胞核中分離純化出來的多肽鏈，直接參與細胞增殖過程中的DNA復(fù)制，其含量和陽性表達是反應(yīng)G1晚期和S早期肝細胞增殖的常用指標(biāo)［6-8］. 在本模型中初期即出現(xiàn)少量肝細胞PCNA陽性著色，而隨著模型進展，尤其在12~16 wk（肝硬化期）PCNA陽性肝細胞數(shù)明顯增加，與肝內(nèi)病變進展呈一致變化. 即隨著肝硬化的形成，異常增殖肝細胞數(shù)目呈明顯增加趨勢，提示從肝臟炎性改變、肝纖維化至肝硬化的形成，異常增殖的肝細胞數(shù)目不斷增加，癌變的可能性亦逐漸增加.
近年來中醫(yī)藥防治肝纖維化取得了不少進展，也積累了豐富的經(jīng)驗，從單味藥、復(fù)方及其有效成份等入手，初步發(fā)現(xiàn)活血化瘀與扶正補虛兩類中藥具有良好的防治肝纖維化作用. 由于采用中草藥治療慢性肝病在臨床上有肯定療效，且又具有無明顯毒性反應(yīng)或副作用的優(yōu)點，因此，是防治肝纖維化較有希望的治療手段，已引起國內(nèi)外肝病研究人員的極大興趣［9］. 健脾扶正法是防治肝硬化與肝癌最常用的方法之一，曾證明對肝硬化和DEN致大鼠肝癌前病變的發(fā)生可能有一定的預(yù)防作用［10-12］. 肝復(fù)健沖劑以健脾益氣立法，組方均為藥食同源中藥，具有低毒、可長期服用的特點. 本實驗結(jié)果顯示該沖劑可明顯減少肝內(nèi)膠原沉積，延緩化學(xué)致癌物DEN所致大鼠肝纖維化過程，同時對肝硬化形成期陽性表達PCNA的肝細胞數(shù)目亦有顯著抑制作用. 提示該沖劑可通過減輕化學(xué)物質(zhì)引起的肝內(nèi)炎性病變，減少肝內(nèi)以I、III型為主的膠原沉積，延緩和減輕肝纖維化過程，同時可抑制肝硬化形成及演變期肝細胞可能的惡性增殖，達到阻抑肝硬化形成及其繼續(xù)發(fā)展為肝癌的作用.
（二）大蒜素對實驗性大鼠肝纖維化的作用研究
大蒜素是強效抗氧化劑，目前國內(nèi)外研究顯示它能增強肝臟谷胱甘肽抗氧化系統(tǒng)功能，能拮抗乙醇氧化性肝損傷。本研究通過對肝臟病理學(xué)、超微結(jié)構(gòu)、細胞外基質(zhì)與肝纖維化相關(guān)指標(biāo)的觀測研究大蒜素對肝纖維化的防治作用。
一、材料和方法
1、材料：SD大鼠46只，雌雄兼用，體重220-260g，由蘇州大學(xué)實驗動物中心提供。大蒜素微粒：江蘇省靖江制藥廠提供，批號：2001011.2。秋水仙堿：昆明制藥有限公司，批號：980732，規(guī)格：0.5mg／片。二甲基亞硝胺(DMN)：上海開明化學(xué)廠生產(chǎn)化學(xué)純，批號：0161072。酶聯(lián)免疫檢測試劑盒等均由上海森雄科技實業(yè)有限公司提供。
2、儀器：①透視電子顯微鏡CH600，日本Hitachi。②酶標(biāo)儀：Denley Dragon Wellscan MKI芬蘭Lab systems提供。
3、方法①動物分組：正常對照組(n=6)：予蒸餾水灌胃，生理鹽水腹腔注射；模型組(n=8)：蒸餾水，DMN；小劑量大蒜素預(yù)防組(n=8)：予大蒜素11mg.kg-1.d-1，DMN；中劑量大蒜素預(yù)防組(n=8)：予大蒜素22mg.kg-1.d-1，DMN；中劑量大蒜素治療組(n=8)：予大蒜素22mg.kg-1．d-1，DMN；秋水仙堿組(n=8)：予秋水仙堿0.15mg.kg-1．d-1，DMN。給藥方法：用生理鹽水將DMN配成0．5％的溶液10mg.kg-1.次-l腹腔注射，第1周每天1次，連續(xù)3d，第2～4周每周1次，第5、6周均每天1次，連續(xù)2d，實驗結(jié)束后腹主動脈取血制備血清。采血后取肝臟左葉常規(guī)固定備用。將大蒜素用蒸餾水分別配成相應(yīng)濃度，按10m1.kg-1．次-1灌胃給藥。除大蒜素中劑量治療組在模型建立3周后給藥，余各組在建模開始時同時給藥。②觀測指標(biāo)及方法：檢測血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)，天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、白蛋白，I型前膠原肽(PINP)、Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)和透明質(zhì)酸(HA)檢測采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。層粘連蛋白(LN)檢測采用酶聯(lián)免疫競爭法。肝組織HE染色及膠原纖維(V-G)、網(wǎng)狀纖維特殊染色(Gommori)。
二、結(jié)果
1、大蒜素對大鼠肝纖維化模型肝功能影響：模型組血清AST和ALT活性明顯增加，分別為正常對照組的1.7倍(p<；0.01)和1.5倍(p<；0.01)。大蒜素抑制DMN所致的上述改變，可使血清AST和ALT活性完全恢復(fù)正常，并能提高血清白蛋白含量，而秋水仙堿則無降低AST、ALT及升高血清白蛋白含量作用(p>；0.05)。
2、大蒜素對大鼠血清纖維化指標(biāo)的影響：模型組LN、HA、P工NP、PⅢNP較正常組明顯增加(p<；0.05)，大蒜素小、中劑量預(yù)防組、中劑量治療組LN、PINP、PⅢNP較模型組明顯下降(p<；0.05)，其中大蒜素中劑量預(yù)防組對降低HA、LN、PINP、PⅢNP作用最大。秋水仙堿組僅對LN、PⅢNP減少作用顯著。
3、大蒜素對肝組織病理學(xué)影響：HE染色、Gommori、V-G染色均顯示大蒜素預(yù)防和治療組與模型組相比，可明顯減輕纖維化等級及SSS分值。
4、光鏡結(jié)果：正常組：肝小葉內(nèi)網(wǎng)狀纖維支架完整，分布規(guī)則，無膠原纖維存在。模型組：肝細胞變性壞死，肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，纖維組織增生，假小葉形成。大蒜素組：中央靜脈周圍可見纖維組織，未見明顯假小葉形成。
5、電鏡結(jié)果：模型組肝細胞萎縮，線粒體固縮或腫脹，細胞內(nèi)見大量脂滴及空泡樣變，小膽管擴張，膽管上皮增生，微絨毛減少。Disse間隙見多處纖維沉積，肝竇內(nèi)皮細胞的窗孔消失，內(nèi)皮細胞下基底膜形成。大蒜素組Disse間隙纖維化明顯減輕，其中中劑量大蒜素組接近正常。
討論
目前研究發(fā)現(xiàn)大蒜素對四氯化碳誘發(fā)大鼠肝損傷引起的AST和脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛水平的升高有明顯的抑制作用，這種作用具有劑量效應(yīng)關(guān)系。
血清LN、HA、PINP、PⅢNP是檢測肝纖維化可靠的血清學(xué)指標(biāo)。其中LN、PⅢNP在肝纖維化過程早期出現(xiàn)，常與肝細胞的炎癥壞死有關(guān)，尤其是LN參與形成肝竇內(nèi)皮細胞基底膜。而HA、PINP在肝纖維化過程晚期出現(xiàn)，可作為衡量藥物抗肝纖維化效應(yīng)指標(biāo)。本組結(jié)果示大蒜素各組PINP、PⅢNP、LN均低于模型組，表明其肝內(nèi)合成纖維受到抑制，肝組織學(xué)顯示大蒜素可降低肝纖維化等級及SSS分值。其中以中劑量預(yù)防組效果最好，電鏡觀察同樣顯示大蒜素各防治組Disse間隙及肝竇纖維沉積及抑制內(nèi)皮細胞基底膜形成較模型組明顯好轉(zhuǎn)。提示大蒜素對實驗性肝纖維化具有一定的預(yù)防和治療作用。
大蒜素抗實驗性肝纖維化的可能機制為：①大蒜素具有良好的抗氧化作用。肝細胞損傷可產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物如丙二醛等激活肝星狀細胞(HSC)合成膠原?？寡趸委熡欣跍p輕肝損傷和肝纖維化。本實驗在DMN造模大鼠中觀察到肝功能改善，提示大蒜素可通過抑制脂質(zhì)過氧化而對肝損傷及纖維化起抑制作用。②間接抑制HSC細胞轉(zhuǎn)化。HSC在肝受損時被激活，轉(zhuǎn)化成肌成纖維細胞(MFBLC)。
目前研究認為，大蒜素由于其抗脂質(zhì)過氧化(LPO)作用使血管內(nèi)前列腺素(PG)I：明顯增加，PGI：能抑制血小板衍生生長因子(PDGF)激活的DNA合成而抑制血管平滑肌細胞增殖。大蒜素可能通過抑制PDGF激活的DNA合成而抑制HSC的增殖。③大蒜素還能提高纖維蛋白自溶解活性，從而使纖維蛋白降解產(chǎn)物(FDP)增加。本組設(shè)立治療組，在肝纖維化造模3周后給藥，結(jié)果表明大蒜素治療組肝臟病理組織學(xué)檢查及膠原蛋白含量與肝纖維化模型組差異有顯著性，說明大蒜素可能具有促進膠原蛋白降解與膠原纖維重吸收的作用?！ ?/p>
圖片介紹：
大鼠肝細胞電鏡像
圖13-14 大鼠肝細胞電鏡像 ×16100
N細胞核，RER粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，M線粒體，G高爾基復(fù)合體，Ly溶酶體，BC膽小管
（上海醫(yī)科大學(xué)電鏡室供圖）
肝細胞核大而圓，居中央，常染色質(zhì)豐富豐色淺，核膜清楚，核仁1至數(shù)個。部分肝細胞（約25％）有雙核，有的肝細胞的核體積較大，為多倍體核。肝細胞核DNA含量分析，正常成體肝細胞以四倍體核占多數(shù)，約占肝細胞總數(shù)的70％左右，還有少量八倍體肝細胞。一般認為，雙核肝細胞和多倍體肝細胞的功能比較活躍。肝細胞是一種高度分化并具有多種功能的細胞，胞質(zhì)內(nèi)各種細胞器豐富而發(fā)達，并含有糖原，脂滴等內(nèi)涵物（圖13-14）。細胞器和內(nèi)涵物的含量與分布常因細胞的功能狀況或飲食變化而變動。在HE染色切片中，肝細胞質(zhì)呈嗜酸性，并含有散在的嗜堿性物質(zhì)，它是由粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)組成的結(jié)構(gòu)。
線粒體：每個肝細胞約有2000個左右，遍布于胞質(zhì)內(nèi)，為肝細胞的功能活動不斷提供能量。
粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（RER）：成群分布于胞質(zhì)內(nèi)，是肝細胞合成多種蛋白質(zhì)的基地。血漿中的白蛋白、纖維蛋白原、凝血酶原、脂蛋白、補體蛋白以及許多載體蛋白等都是在RER的核糖體上合成。然后經(jīng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)池轉(zhuǎn)移到高爾基復(fù)合體，組裝形成運輸小泡或直接經(jīng)胞質(zhì)的基質(zhì)，從血竇面排出。
滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（SER）：廣泛分布于胞質(zhì)內(nèi)，SER膜上有多種酶系分布，如氧化還原酶、水解酶、轉(zhuǎn)移酶、合成酶等。肝細胞攝取的各種有機物可在SER進行連續(xù)的合成、分解、結(jié)合和轉(zhuǎn)化等反應(yīng)，故肝細胞SER有多種功能，如膽汁合成和膽紅素、脂類與激素的代謝以及生物轉(zhuǎn)化等。膽汁中的重要成分膽酸，是在SER的酶作用下由膽固醇轉(zhuǎn)變而成。肝細胞從血液中攝取的脂肪酸，是在SER的酶作用下由膽固醇轉(zhuǎn)變而成。肝細胞從血液中攝取的膽紅素，在SER上的葡萄糖酸轉(zhuǎn)移酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)樗苄缘慕Y(jié)合膽紅素，經(jīng)膽汁排出。肝細胞攝取的脂肪酸，在SER上再度酯化為甘油三脂，并與蛋白質(zhì)結(jié)合形成極低密度脂蛋白（VLDL）。多種激素尤其是類固醇激素的滅活，也是在SER上進行的。機體代謝過程中產(chǎn)生的某些有毒產(chǎn)物或從腸道吸收入肝的有害物質(zhì)（藥物、腐敗產(chǎn)物等），經(jīng)SER的酶氧化、還原、水解、結(jié)合等生物轉(zhuǎn)化作用，使其毒性減弱或水溶性增強而易于排泄。若經(jīng)常服用某些藥物（如巴比妥等），可促使肝細胞的SER增生，酶活性增強，機體對這些藥物的耐受性也增強。
高爾基復(fù)合體：每個肝細胞約有50個。高爾基復(fù)合體參與肝細胞的分泌活動，RER合成的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到高爾基復(fù)合體進行加工或貯存，然后經(jīng)運輸小泡由血竇面排出。肝細胞近膽小管處的高爾基復(fù)合體尤為發(fā)達，與膽小管面質(zhì)膜的更新及膽汁的排泌有關(guān)。
溶酶體：數(shù)量和大小不一。肝細胞吞飲的物質(zhì)、退化的細胞或細胞內(nèi)過剩物質(zhì)常與溶酶體融合，被水解酶消化分解，或滯留在溶酶體內(nèi)。溶酶體的這種作用，對肝細胞結(jié)構(gòu)的不斷更新和細胞正常功能的維持十分重要。
過氧化物酶體（微體）：為圓形小體，大不不一，人肝細胞微體呈均質(zhì)狀結(jié)構(gòu)，有的動物（鼠）肝細胞微體有致密核芯。微體內(nèi)主要含過氧化氫酶和過氧化物酶，它們可將細胞代謝產(chǎn)生的過氧化氫還原為水，以消除過氧化氫對細胞的毒性作用。微體內(nèi)還有黃嘌呤氧氧化酶等，它們能將核酸的代謝產(chǎn)物嘌呤氧化為尿酸，由尿中排出。鼠肝細胞微體內(nèi)的核芯含尿酸氧化酶，人肝細胞微體內(nèi)無核芯，也不含尿酸氧化酶。
內(nèi)涵物：肝細胞內(nèi)有糖原、脂滴、色素等內(nèi)涵物，它們的含量因機體的生理和病理狀況的不同而異。進食后糖原增多，饑餓時糖原減少。正常肝細胞內(nèi)脂滴少，肝病時脂滴多。肝細胞胞質(zhì)的色素有膽紅素、含鐵血黃素、脂褐素等，它們也可以貯存在溶酶體內(nèi)，脂褐素的含量隨機體年齡的增長而增多。
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