電泳
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電泳(electrophoresis)，荷電顆?；?a href="/w/%E5%88%86%E5%AD%90" title="分子">分子在電場中的泳動。1927年A.蒂塞利烏斯設(shè)計完全在液相中泳動的移動界面電泳，開創(chuàng)了電泳法分離蛋白質(zhì)的先例。 將待分離蛋白質(zhì)溶液置于U形管中，其上覆以緩沖溶液，兩端通以電流。在電泳時，各蛋白質(zhì)向其相反電極的方向移動，通過光學折射系統(tǒng)，可察見各蛋白質(zhì)移動的界面。但此法構(gòu)造復雜，價格昂貴，難以普及使用。隨后在固相支持體中進行帶狀電泳，又設(shè)計出等電聚焦電泳、免疫電泳等，電泳技術(shù)日臻完美，應(yīng)用范圍日趨廣泛。在臨床醫(yī)學中可利用電泳分析電液蛋白質(zhì)各組分（如血漿脂蛋白）的比例失調(diào)，或某組分的丟失（如無γ球蛋白血癥），或某異常成分（如異常血紅蛋白）的出現(xiàn)，有助于診斷許多疾病。對蛋白尿的鑒別診斷亦頗有幫助。利用雙向電泳可將細胞內(nèi)上千種蛋白質(zhì)成分分開，這一技術(shù)已開始應(yīng)用于臨床醫(yī)學以診斷疾病。
原理
分子在電場中的泳動速度 (v)決定于其外加電場強度(E)，以及與其分子的大小形狀關(guān)連的摩擦系數(shù)(┃)和荷電狀況(q)
在電泳過程中，外加電場強度 (E)是恒定的，分子的泳動速率（μ，單位電場下的遷移速度）等于q/┃，分子荷電多，顆粒小，呈球狀（而非纖維狀）者，泳動速率快;反之則慢。故電泳可將各種不同的蛋白質(zhì)分開，通過染色可顯出各蛋白質(zhì)的區(qū)帶。鑒于同種蛋白質(zhì)分子在同一電泳條件下的泳動速率必然相同，因此電泳可用以確定蛋白質(zhì)的純度;若與已知的標準蛋白質(zhì)同時電泳，還可鑒定該蛋白質(zhì)。
種類
電泳可按不同的標準分類：
① 按照電泳支持體的不同，發(fā)展成各種帶狀電泳。如支持體為濾紙者稱紙上電泳，其他的支持體尚有醋酸纖維薄膜，淀粉凝膠，聚丙烯酰胺凝膠（由丙烯酰胺及甲叉雙丙烯酰胺聚合而成，因二者的濃度及比例不同，可構(gòu)成大小不同的凝膠孔徑），以及瓊脂糖凝膠等（因瓊脂糖凝膠孔徑大，適用于分離大分子核酸）。通常血漿蛋白質(zhì)在紙上電泳或醋酸纖維薄膜電泳中，可分成清蛋白、α 球蛋白、β球蛋白及γ球蛋白諸帶；而在聚丙烯酰胺凝膠電泳中則可進一步分成三十余條帶。
② 按照分子的荷電狀況的不同，發(fā)展成二類。等電聚焦電泳(IEF)，是將兩性電解質(zhì)固定于支持體上，外加電場時，因處于各部位上的兩性電解質(zhì)受兩端電場強度的影響不同，其解離狀態(tài)不一，形成了一系列的pH梯度。當?shù)鞍踪|(zhì)泳動至某部位，該部位的pH正好與其等電點相同時，該蛋白質(zhì)就在該處停留不動，這樣可將不同等電點的蛋白質(zhì)分開。SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。 這是蛋白質(zhì)在含有十二烷基磺酸鈉 (SDS)的緩沖液中進行電泳。蛋白質(zhì)分子均因帶上SDS而荷負電。 平均每克蛋白質(zhì)約結(jié)合1.4克SDS，且蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)均被破壞而變性伸展，形狀一致，因此泳動速率只與分子的大小有關(guān)?？山枰詼y定蛋白質(zhì)的分子量。
③ 聯(lián)合兩種不同的電泳方式。 雙向電泳即 SDS-IEF凝膠電泳。這是基于IEF對泳動率的決定因素是分子的電荷；而 SDS電泳則是基于分子量的大小。故若首先進行IEF，然后換成垂直方向，進行SDS電泳，兩者配合，在同一張凝膠片上可同時分離上千種蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)移電泳。這是因為在凝膠電泳后難以用免疫化學或酶反應(yīng)染色，也難以對核酸進行雜交鑒定。乃通過轉(zhuǎn)移電泳，將凝膠上已分開的各帶，通過轉(zhuǎn)移電泳，轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素薄膜上，方可進行特殊染色，或分子雜交，或進一步進行序列分析等。
近年來電泳技術(shù)更向微量化，快速化，自動化及高分辨力發(fā)展，如毛細管電泳等，成為生物化學實驗研究中最重要的手段之一。
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