核糖核酸酶A
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核糖核酸酶A [RNase A]
核糖核酸酶A是內(nèi)切核糖核酸酶,可特異地攻擊RNA上嘧啶殘基的3'端,切割與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵。反應(yīng)終產(chǎn)物是嘧啶3'磷酸及末端帶嘧啶3'磷酸的寡核苷酸。無(wú)輔因子及二價(jià)陽(yáng)離子存在時(shí),核糖核酸酶A的作用可被胎盤(pán)RNA酶抑制劑(B1ackburn et al.1977)或氧釩—核糖核苷復(fù)合物(Puskas et al.1982)所抑制。
用途
(1)從DNA-RNA或RNA—RNA雜合體中去除未雜合的RNA區(qū)。
(2)確定DNA或RNA中單堿基突變的位置(Myers et al.1985,Winter et al.1985)。 在此方法中,RNA-DNA或RNA-RNA雜合體上的單堿基錯(cuò)配可被RNA酶A識(shí)別并切割。利用含SP5或T7噬菌體啟動(dòng)子的質(zhì)粒,在體外合成與野生型DNA或RNA互補(bǔ)的32p標(biāo)記RNA探針,然后與待檢含單堿基置換的DNA或RNA退火, 所產(chǎn)生的單堿基錯(cuò)配可用RNA酶A切割,通過(guò)凝膠電泳分析切割產(chǎn)物的大小即可確定錯(cuò)配的位置。在所有各種可能的單堿基錯(cuò)配中,大約50%可用此法確定。
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