克隆載體
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克隆載體(Cloning Vector):通常采用從病毒、質(zhì)粒或高等生物細(xì)胞中獲取的DNA作為克隆載體,在載體上插入合適大小的外源DNA片段,并注意不能破壞載體的自我復(fù)制性質(zhì)。將重組后的載體引入到宿主細(xì)胞中,并在宿主細(xì)胞中大量繁殖。常見(jiàn)的載體有質(zhì)粒,噬菌粒,酵母人工染色體。
對(duì)載體的要求:①能在宿主細(xì)胞中復(fù)制繁殖,而且最好要有較高的自主復(fù)制能力。
②容易進(jìn)入宿主細(xì)胞,而且進(jìn)入效率越高越好。
③容易插入外來(lái)核酸片段,插入后不影響其進(jìn)入宿主細(xì)胞和在細(xì)胞中的復(fù)制。這就要求載體DNA上要有合適的限制性核酸內(nèi)切酶位點(diǎn)。
④容易從宿主細(xì)胞中分離純化出來(lái), 這才便于重組操作。
⑤有容易被識(shí)別篩選的標(biāo)志,當(dāng)其進(jìn)入宿主細(xì)胞、或攜帶著外來(lái)的核酸序列進(jìn)入宿主細(xì)胞都能容易被辨認(rèn)和分離出來(lái)。這才介于克隆操作
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